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人用狂犬病毒保护性抗体检测检测试剂盒 
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货号: AK200H

产品

通用名称:人用狂犬病毒保护性抗体检测试剂盒(酶联免疫法)

英文名称:Human rabies virus protective antibody detection kit (ELISA)

包装规格

规格

48人份/

包被板

12×8

质控品

40μL×1

100×酶结合物

120μL×1

酶结合物稀释液

12mL×1

样本稀释液

12mL×1

20×PBST

50m1

终止液

6mL×1

底物显色液A

6mL×1

底物显B

6mL×1

校准品(1.5IU/mL

40μL×1

校准品(0.5IU/mL

40μL×1

封板膜

2

         注:校准品靶值详见瓶签。

预期用途

本试剂盒仅限用于血清样本中狂犬病毒保护性抗体的半定量检测。仅适用于体外检测用途

检验原理

本品采用间接ELISA方法用重组狂犬病毒G蛋白包被可拆酶联反应板,加入待检标本反应后洗涤除去未结合加入辣根过氧化物标记的山羊抗人IgG多抗形成了包被重组狂犬病毒G蛋白-抗体-HRP标记多抗复合物通过TMB色程度指示样品中保护性抗体含量。用配套酶标仪检测酶联板,根据OD450值判定检测结果。样品中狂犬病毒保护性抗体浓度与OD450值呈正比的量效关系。

【主要组成成分】

包被板:包被重组狂犬病毒G蛋白

质控品:人阴性血清,从未接种过狂犬疫苗人群中采集而来,血清中狂犬病毒保护性抗体滴度不大于0.1 IU/ml

酶结合物:辣根过氧化物酶标记山羊抗人多抗

酶结合物稀释液:20% 小牛血清-磷酸盐缓冲液

样本稀释液:样本缓冲液(0.01M PBS-TRITON X100

20×PBST液:0.2M PBS-0.05% Tween 20

终止液:0.2M H2SO4

底物显色液A 30% 双氧水

底物显B 4%TMB+柠檬酸钠缓冲液

校准品:将人狂犬病毒抗体阳性血清标准品用人阴性血清稀释到目标浓度为C11.5 IU/mL)和C20.5 IU/mL)溶液各一瓶。

封板膜:白色不干胶纸

储存条件及有效期

试剂盒密闭放置于2-8,避光保存,有效期6个月。

包被板2℃-8℃密闭保存,效期为6个月;2℃-8℃开封使用后重新封存,可以稳定28天。

试剂:2℃-8℃密闭保存,效期为12个月;2℃-8℃开瓶后保存,可以稳定28天。

校准品、质控品:2℃-8℃密闭保存,效期为12个月;2℃-8℃开瓶后保存,可以稳定28天。

【适用仪器】

本试剂盒已在THERMO FISHER Multiskan FC酶标仪上验证合格。

【样本要求】

1.    新鲜的血清。

2.    血清中狂犬病毒保护性抗体在常温10℃-30℃下可稳定3天,如保存期需超过3天,则应将血清保存在-20℃,避免反复冻融。

3.    溶血和浑浊等对吸光度有干扰的样本可能影响测定结果。

4.    样本检测前须恢复室温,并充分混匀。

检验方法

1. 平衡:将所需试剂移到室温(10℃-30℃)平衡30分钟。为保证检测结果的准确性,推荐检测时使用复孔。

2.   溶液配制:

洗涤液:取120×PBST洗液,用纯化水20倍稀释,混匀后备用。

酶结合物工作液:取所需的100×酶结合物用酶结合物稀释液100倍稀释,充分混匀后避光放置,备用。

3. 加样:将包被板从密封袋中取出,将质控品、校准品(1.5 IU/mL0.5 IU/mL)及待检样本使用样本稀释液20倍稀释,然后按照100μL/孔的体积加样。用封板膜封板,置37℃恒温震荡培养箱,200rpm,孵育60分钟。

4. 洗涤:使用自动洗板机操作,弃去各孔内液体后,用洗涤液洗涤微孔(250μL/孔),共重复洗涤3次。最后一次洗板完成后在面巾纸上拍干(可选)。

5. 加酶结合物工作液:每孔加酶结合物工作液100μL。用封板膜封板,置37℃恒温震荡培养箱,200rpm,孵育60分钟。

6. 洗涤:同步骤4

7. 显色:每孔分别加底物显色液A 50μL,底物显色液B 50μL,轻微振荡混匀后置25℃避光显色5分钟。

8. 终止:每孔加终止液50μL,轻微混匀。

9. 数据测定:选择酶标仪,主波长450nm,参考波长620nm630nm(可选),在加入终止液后30分钟之内测定各孔OD值并记录数据。

10. 数据处理:若选择了参考波长,则利用OD450-OD620的数据计算复孔平均值作为最终数据;若只有主波长,则使用主波长的数据计算复孔平均值作为最终数据。

步骤简图


稀释后的质控品、校准品和待测样本(100μL/孔)

混匀后,37孵育60min200rpm

洗涤 3拍干,加入酶结合物工作液(100μL/孔)

混匀后,37孵育60min200rpm

洗涤 3拍干,加入显色液 A B(各 50μL/孔)

25避光反应5min

加入终止液(50μL/孔)

测定 OD450nm(或OD450nm -OD620nm 数据值

【参考区间】

正常参考值范围:大于等于0.5 IU/mL

根据文献《狂犬病疫苗-世卫组织立场文件》[1],血清中狂犬病毒保护性(中和)抗体水平最低滴度为0.5 IU/mL

检验结果的解释

1.     OD(校准品-0.5IU/mL/ OD(质控品)的值大于2。则本次实验结果有效。

2.     检测样本的复孔OD值的相对偏差不大于15%,若大于15%应重复检测该样本。

3.     在满足前面条件的情况下,对检测结果判定:

a)样本OD于等于校准品-1.5IU/mLOD值,表明样本中狂犬病毒保护性抗体滴度大于等于1.5 IU/mL,为强阳性;

b)样本OD于等于校准品-0.5IU/mLOD值且小于校准品-1.5IU/mLOD表明样本中狂犬病毒保护性抗体滴度在0.5~1.5IU/mL间,为弱阳性;

c样本OD于校准品-0.5IU/mLOD值,表明样本中狂犬病毒保护性抗体滴度小于0.5IU/mL,为阴性。

【检验方法的局限性】

试剂盒的检测结果仅供临床参考,不能单独作为确诊或排除病例的依据。为达到诊断目的,此检测结果要与临床检查、病史和其他的检查结果结合使用。

注意事项

1. 本试剂仅用于体外诊断。

2. 全部检工作必须符合生物安全守则规定,严格防止交叉感染。

3. 检测结的判定必须以酶标仪读数为准。

4. 标本和结合物均应使用加液器加注,并经常校对加液器准确性。

5. 各批次剂不能混用。

6. 采用不同方法学的试剂检测所得结果不应直接相互比较,以免造成错误的医学解释,建议实验室在发给临床医生的检测报告中注明所用试剂方法学。

7.试剂含有潜在感染性,请根据相关医疗废弃物处理规定处置接触过试剂和检测标本的试管等器具。

8.试剂若不慎溅到人体表面如皮肤、眼睛等,必须用大量清水冲洗,如果误食则需要到医院治疗。

【参考文献】

1.WHO 2005. WHO expertconsultation on rabies. World health organization.327 Geneva. 121 pp.



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