派迪畅科技

AnyGo Technology

【产品信息】

产品名：新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名称：SARS-CoV-2Antibody Assay Kit（ELISA）

货号：XG100H2

规格：96T

【预期用途】

本试剂盒用于体外定性测定人血液样本（血浆、血清）中新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗体。

适用于各级医疗机构针对就诊患者、复工员工、返校学生及居民进行SARS-CoV-2病毒抗体快速筛查，可实现快速精准的血清学检测。

仅限于体外科研用途。

【检验原理】

本品采用间接ELISA方法原理，用重组表达的SARS-CoV-2病毒S1蛋白包被可拆酶联反应板，加入待检标本反应后，洗涤除去未结合物，加入辣根过氧化物标记的山羊抗人IgG（H+L）多抗，形成了包被重组SARS-CoV-2病毒S1蛋白-抗体-HRP标记多抗复合物，通过TMB显色程度来指示样品中抗体含量。

用配套酶标仪检测酶联板，根据OD450值判定检测结果。样品中SARS-CoV-2病毒抗体浓度与OD450值呈正比的量效关系。

【主要组成成份】

注：阴性质控品的转换系数具有批特异性，具体值请参见组分标签。

【储存条件及有效期】

1. 试剂盒密闭放置于2℃-8℃，避光保存，有效期12个月。

2. 开封后有效期3个月。

【仪器要求】

多功能酶标仪：用于显色结果数据测定。

【试剂和耗材要求】

试剂盒中不包含，需自行准备以下试剂和耗材。

1.纯化水：超纯水或去离子水.

2.终止液：0.2M H₂SO_4.

3.移液器，计时器，配套枪头等

【样本要求】

1. 样本类型

可检测的样本类型为人血浆、血清。

2.溶血和浑浊等对吸光度有干扰的样本可能影响测定结果。

3.样本的收集和处理

采血后分离出的血清/血浆样本在2-8℃储存时间不得超过1周。如果无法在采血后1周内进行测定，需将血浆/血清样本密封后，置于-20℃以下，不超过1个月，避免反复冻融。

【检验方法】

1.平衡

将所需试剂移到室温（10℃-30℃）平衡30分钟。为保证检测结果的准确性，检测时使用复孔。

2.溶液配制

洗涤液：取1瓶20X洗涤液，用纯化水20倍稀释（例：50ml的20X洗涤液加950ml的纯水稀释），彻底混匀后备用。

酶结合物工作液：取出100X酶结合物用稀释液稀释100倍（例：110μl的100X酶结合物加10.9ml的稀释液稀释），充分混匀后避光放置，备用。

3.加样

将待测样本和质控品使用稀释液稀释20倍（例：11μl的样本加209μl的稀释液稀释），混匀。

将包被板从密封袋中取出，然后根据附表1推荐上样顺序将稀释后的质控品和样本按照100μL/孔的体积加样（建议使用复孔进行检测），轻拍板混匀。

置于室温孵育30分钟（每隔5分钟轻轻拍板混匀，或置于恒温震荡器中，以保证检测效果）。

4.洗涤

使用自动洗板机操作，弃去各孔内液体后，用洗涤液洗涤微孔（250μL/孔），共重复洗涤3次，然后弃掉板内所有液体（建议在纸上拍干）。

5.加酶结合物工作液

每孔加酶结合物工作液100μL。置于室温孵育15分钟（每隔5分钟轻轻拍板混匀，或置于恒温震荡器中，以保证检测效果）

6.洗涤

同步骤4。

7.显色

每孔分别加底物显色液A 50μL，底物显色液B 50μL（A、B液均需避光处理，建议先加A液，所有孔加完A液后再加B液），轻微振荡混匀后置25℃避光显色5-10分钟（显色时间可根据显色效果来决定，如加完显色液后迅速显色且颜色较深，则可立即进行下一步的终止反应）。

8.终止

按照加A、B液的顺序在每孔中加入终止液50μL，轻微混匀。

9.数据测定

选择酶标仪，主波长450nm，在加入终止液后30分钟之内测定各孔OD值并记录数据，同时拍照记录显色结果。

10.数据处理

若选择了参考波长（620nm或630nm），则利用主波长减去参考波长的数据计算复孔平均值作为最终数据；若只有主波长，则使用主波长的数据计算复孔平均值作为最终数据。

【检验结果的解释】

1.计算阴性质控品吸光度值（OD450）的平均值（AVG1），AVG1乘以转换系数作为阴性临界点值（Cut-off）.

2.计算阳性质控品的吸光度值（OD450）的平均值（AVG2），作为阳性临界点值（PC）。

3.若样本吸光度值大于等于阳性临界点值（PC）,则该样本检测结果为阳性，表示检测到样本中有识别新型冠状病毒的抗体；若样本吸光度值小于阴性临界点值（Cut-off）,则该样本检测结果为阴性，表示未检测到样本中有识别新型冠状病毒的抗体；若样本吸光度值小于阳性临界点值（PC）且大于等于阴性临界点值（Cut-off）,则该样本检测结果为灰区，需进一步的实验确认。

【检验方法的局限性】

1．超出试剂盒测定范围的测定结果，结果不可信。

2．严重溶血样本会导致检测结果异常。

3.试剂盒的检测结果仅供临床参考，不能单独作为确诊或排除病例的依据。为达到诊断目的，此检测结果要与临床检查、病史和其他的检查结果（核酸检测等）结合使用。

【注意事项】

1．本试剂仅用于科研用体外检测。

2. 真空包装的包被板若发生漏气吸潮，可能会导致检测结果异常。

3. 不同批次、不同品种的试剂不得混用。

4. 请严格按照说明书合理储存和使用试剂。

5．避免阳光直射。

6．检测工作必须符合生物安全守则规定，严格防止交叉感染。

7．所有样品、洗涤液和各种废弃物都应当作潜在危害性物质处理。

【参考文献】   

ZhaoRQ et .al “Early detection of SARS-CoV-2 antibodies in COVID-19 patients as aserologic marker of infection” submitted   

【基本信息】

注册人：北京派迪畅科技发展有限公司

生产企业：江苏拜明生物技术有限公司

【医疗器械注册证编号/产品技术要求编号】

申请中

【说明书核准及修改日期】

核准日期：2020/04/01      修改日期：2020/04/02

附表1：推荐上样顺序